用多聚甲醛固定懸浮細胞

 

    常用的固定劑種類很多，固定劑的正確選擇取決于被研究抗原的性質及所用抗體的特性。固定劑可分為兩大類：有機溶劑和交聯劑。有機溶劑如乙醇和丙酮能夠去除脂類物質使細胞脫水，把蛋白質沉淀在細胞結構上。交聯劑一般通過自由氨基基團把生物分子橋連起來，形成一個相互連接的抗原網。兩種方法均使蛋白質抗原部分變性。因此，在細胞染色中，能夠識別變性蛋白的抗體更加有用。在某些情況下，只有用此類抗體才能得到滿意的結果。

 

    往往憑經驗選擇固定劑。雖然許多人發現用交聯劑固定細胞可以獲得較好的結果，但沒有通用規則可以參考。可以試用兩種方法，然后選擇較好的一種。

 

    懸浮細胞染色通常用于檢測細胞表面抗原。因為細胞呈懸浮狀態，洗滌過程復雜，因此，應注意離心時間不要過長或轉速太高。

 

    1．所需溶液

    4％多聚甲醛(臨用前配制)、PBS。

 

    2．操作步驟

    (1)PBS配制4％多聚甲醛；

    (2)用PBS洗滌細胞2次，用200g離心5min；重懸細胞。

    (3)小心用4％多聚甲醛溶液懸浮細胞，細胞濃度約為1X106／m1 15min，間或搖動；

    (4)200g離心5rain，用PBS重懸細胞，重復洗滌細胞2次；室溫下靜置

    (5)用含0．2％TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化細胞2min(室溫)，有的抗原需15min，具體時間視抗原而定；

    (6)200g離心5rain，用PBS重懸細胞，重復洗滌細胞2次。 

    此時的細胞標本可用于后續的抗體檢測。